Как использовать клеточные пеллеты в качестве контролей в иммуногистохимии (ИГХ) | Технические со...

При подготовке экспериментов по иммуногистохимии контрольные образцы клеточных осадков могут показать, работает ли протокол или его нужно скорректировать. 👉Подписаться: http://youtube.com/user/cellsignaldotcom?sub_confirmation=1 👉Протоколы и устранение неполадок CST: http://cellsignal.com/protocols 👉Свяжитесь с ученым CST: http://cellsignal.com/support 💡 Получите информацию и советы по методам, публикациям и построению научной карьеры: https://www.cellmentor.com/ Транскрипт: Как использовать контрольные образцы клеточных осадков в иммуногистохимии? Я Крис Грейндж из группы иммуногистохимии в Cell Signaling Technology, и это советы от CST Tech. Легко нанести антитело на образец для иммуногистохимии и получить сигнал. Но для уверенности в том, что ваше антитело обнаруживает свою целевую мишень, а не что-то другое, необходимы соответствующие контрольные образцы. Имейте в виду, что контрольные образцы, используемые в других приложениях, например, в вестерн-блоттинге, предоставляют информацию о специфичности антител только в этом контексте. Поэтому при подготовке экспериментов по иммуногистохимии (ИГХ) вам следует использовать соответствующие контрольные образцы. Сегодня я расскажу об одном типе контрольных образцов для ИГХ — клеточных осадках. Фиксированные формалином и залитые парафином клетки легко получить, и они удобны как в качестве положительных, так и отрицательных контролей. Контрольные образцы клеточных осадка часто используются при начале новой серии экспериментов или при получении нового антитела, и вы хотите быть уверены, что оно будет работать должным образом с вашим протоколом ИГХ. Контрольные образцы тканей могут быть полезны, если известно, что одна ткань сильно экспрессирует ваш белок, а другая — что экспрессия гораздо более ограничена. Но для многих белков не так просто определить, какие ткани использовать в качестве контролей. В этой ситуации клеточные осадки с дифференциальной экспрессией вашего белка могут быть ценными. В идеале, у вас должна быть одна клеточная линия, эндогенно экспрессирующая целевой белок, в качестве положительного контроля, и другая, не экспрессирующая его, в качестве отрицательного, чтобы получить репрезентативную картину уровней экспрессии целевого белка. Если такие линии недоступны, часто информативными могут быть клеточные линии, экспрессирующие белок на более высоком и более низком уровнях. В качестве альтернативы, вы можете использовать культивированные клетки, трансфицированные белком, в качестве положительного контроля, а клетки, трансфицированные контрольным раствором, в качестве отрицательного. Если вы используете положительные и отрицательные клеточные линии и видите окрашивание в отрицательной клеточной линии, то необходимы корректировки протокола. Если с помощью корректировки протокола или титрования антител вам не удается устранить сигнал в отрицательной клеточной линии, то используемое вами антитело, вероятно, не подходит для ИГХ. Теперь поговорим о методах обработки, которые можно использовать с клеточными гранулами, а иногда и с другими типами контролей. Состояние экспрессии или активации некоторых белков можно изменить, обрабатывая клетки лигандами, такими как факторы роста или лекарственные препараты. Для фосфоспецифических антител это включает обработку образца фосфатазой для подтверждения специфичности. Если такая возможность доступна для интересующей мишени, эти системы могут быть одними из наиболее информативных моделей клеточных осадков. Если клеточные осадки дают четкие результаты, вы можете быть уверены в совместимости антитела и протокола. Это важно, но следует отметить, что одних только клеточных осадков недостаточно для подтверждения специфичности антитела. Необходимы дополнительные контрольные образцы, но контроль клеточных осадков — это отличное начало. Спасибо за просмотр. Полные протоколы для каждого антитела, специфичные для конкретного применения, вы можете найти на странице продукта по адресу http://cellsignal.com. Если у вас возникнут дополнительные вопросы об антителе или протоколе, вы можете связаться с одним из наших ученых по адресу http://cellsignal.com/support. Чтобы посмотреть больше видео с техническими советами, подпишитесь на наш канал, и до встречи в следующий раз! Удачи в ваших экспериментах! 👉О компании CST: Cell Signaling Technology (CST) — это частная семейная компания, основанная учеными и занимающаяся предоставлением высококачественных исследовательских инструментов для биомедицинского исследовательского сообщества. Наши сотрудники работают по всему миру, начиная с головного офиса в Массачусетсе, США, и заканчивая офисами в Нидерландах, Китае и Японии. http://cellsignal.com/about #Иммуногистохимия #СоветыCSTTech